實(shí) 習(xí) 報(bào) 告
題 目：草莓的組織培養(yǎng)與相關(guān)培養(yǎng)基的制備
學(xué) 院： 植物保護(hù)學(xué)院
學(xué) 號(hào)： 20XX033020203
學(xué)生 姓名： 陳 英 化
指導(dǎo) 教師： 趙 巖
二〇〇 七 年 六 月 一 日
草莓的組織培養(yǎng)與相關(guān)培養(yǎng)基的制備
本次實(shí)習(xí)主要是學(xué)習(xí)草莓培養(yǎng)基的制備和草莓的組織培養(yǎng)法，為以后從事草莓方面的工作與研究打基礎(chǔ)
1 材料和方法：
1.1 供試植物材料：
草莓品種：（1）童子Ⅰ號(hào)： 取自河北農(nóng)業(yè)大學(xué)草莓試驗(yàn)田
（2）達(dá)塞萊克特：取自河北農(nóng)業(yè)大學(xué)草莓試驗(yàn)田
1.2 草莓組培苗的繁殖：
1.2.1 MS培養(yǎng)基的制備
（一）母液的配制：（參見附錄一、二）
（1）1mol·L-1 酸堿配制：稱取4gNaOH，溶解后定容于100ml去離子水中，即配成1mol·L-1NaOH溶液；量取8.4ml濃鹽酸（12 mol·L-1），加去離子水定容至100ml，即配成1mol·L-1的鹽酸溶液。
（2）大量元素母液配制（H4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O）一定要分別稱量，分別溶解，再定容。倒入貯液瓶中，貼好標(biāo)簽（日期、種類、倍數(shù)），放入冰箱內(nèi)（2~4℃）或常溫。
（3）微量元素母液配制（MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）、ZnSO4·7H2O、H3BO3 、KI、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、CuSO4·5H2O）分別稱量，分別溶解（用蒸餾水或去離子水），定容。貼標(biāo)簽（日期、種類、倍數(shù)），放入冰箱內(nèi)（2~4℃）或常溫。
（4）鐵鹽母液配制（FeSO4·7H2O、Na2EDTA）：5.57ｇ硫酸亞鐵和7.45ｇ乙二胺四乙酸鈉，分別用450ml去離子水（或蒸餾水）溶解，分別適當(dāng)加熱并不停攪拌，待分別溶解后，再將2種溶液混合在一起，調(diào)整PH值到5.5，最后加蒸餾水或去離子水定容于1000ml，倒入棕色瓶中，貼好標(biāo)簽放入冰箱保存。
（5）有機(jī)物母液配制：（肌醇、煙酸（VB3煙酸胺素（VB1）、煙酸吡多醇（VB6）、甘氨酸）稱量，分別溶解，用蒸餾水或去離子水定容，放入細(xì)口瓶中備用，貼好標(biāo)簽放入冰箱保存。
（6）配制0.2mg·L-1BA（6-芐基氨基嘌呤）：稱20mg加少量1mol·L-1的鹽酸溶解，然后用加熱的蒸餾水定容100ml，配制1L培養(yǎng)基吸取量為1ml。
（7）配制0.5mg·L-1 IBA（吲哚丁酸）：稱50mg加少量95％乙醇溶解，然后用加熱的蒸餾水定容100ml，配制1L培養(yǎng)基吸取量為1ml 。
（二）培養(yǎng)基的配制：
（1）稱蔗糖（分化培養(yǎng)基用30ｇ；生根培養(yǎng)基用20ｇ）、瓊脂5ｇ用涼水調(diào)成糊狀。
（2）取一定量的去離子水或自來水（一般是培養(yǎng)基量的80％～90％），加入不銹鋼鍋內(nèi)，用電磁爐加熱。母液依次按NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O；MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）、ZnSO4·7H2O、H3BO3 、KI、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、CuSO4·5H2O；FeSO4·7H2O、Na2EDTA；肌醇、煙酸（VB3）、煙酸胺素（VB1）、煙酸吡多醇（VB6）、甘氨酸順序吸取。
（3）水開后，加入蔗糖和瓊脂，不斷攪拌，開鍋后停止加熱。
（4）將量取好的母液倒入上述已加熱的鍋內(nèi)，不斷攪拌，使其均勻溶解。
（5）定容（考慮由溫度引起的體積變化）
（6）調(diào)整培養(yǎng)基的PH值為5.8～6.0（用1mol·L-1NaOH溶液和1mol·L-1的鹽酸溶液）。
（7）培養(yǎng)基的分裝每40ml裝入100ml三角瓶，用封口膜封瓶口，再用牛皮紙將瓶口包扎，對(duì)培養(yǎng)基及時(shí)做好標(biāo)記。
（8）培養(yǎng)基的滅菌和保存：在壓力表達(dá)0.105～0.120MPa時(shí)，滅菌20min，放置2～3d進(jìn)行觀察，若無(wú)污染跡象則可使用［3］。
（9）分化培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基，附加BA 0.5mg·L-1，蔗糖30g，瓊脂5g；生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.5mg·L-1+蔗糖20g+瓊脂5g。
1.2.2 外植體的生長(zhǎng)與分化
取匍匐莖頂梢剪去葉片，在自來水下沖洗干凈，取出已長(zhǎng)出的小葉。在超凈工作臺(tái)上，用70％酒精殺菌30s，用無(wú)菌水沖洗3次（3min/次），再用0.1%升汞泡7~8min，用無(wú)菌水沖洗3~5次（5~10min/次）。用無(wú)菌尖頭鑷子將匍匐莖莖尖外面的包葉剝?nèi)�，用鑷子將幼葉一一剝?nèi)�，切取盡可能小的莖尖（0.1~0.3mm），置于分化培養(yǎng)基中（MS培養(yǎng)基，附加BA 0.5mg·L-1，蔗糖30g，瓊脂5g）于光照度3000 lx，光周期8~10h，溫度20~28℃條件下培養(yǎng)20d左右［1］。
1.2.3 試管苗的生根
取40mlMS生根培養(yǎng)基（1/2MS+IBA0.5mg·L-1+蔗糖20g+瓊脂5g）置于100ml三角瓶中，每瓶接種4株長(zhǎng)勢(shì)基本相同的試管苗，于光照4000 lx，光周期14h，溫度20~27℃條件下培養(yǎng)約30d［2］。
參 考 文 獻(xiàn)
[1] 牛建新，魯曉燕，于艷華．外植體和培養(yǎng)因子對(duì)草莓不定芽誘導(dǎo)的影響［J］．北方園藝，1999，3：30～31．
[2] 甄文超，曹克強(qiáng)，代 麗，等．連作草莓根系分泌物自毒作用的模擬研究［J］．植物生態(tài)學(xué)報(bào)，20XX，28(6)：828～832．
[3] 李 云 主編，林果花菜組織培養(yǎng)快速育苗技術(shù)［M］．中國(guó)林業(yè)出版社．20XX．6．
[4] 沈德緒．果樹育種學(xué)［M］．上海：上�？茖W(xué)技術(shù)出版社，1980．
附錄1—草莓組織培養(yǎng)MS培養(yǎng)基配方［4］
Formula of MS culture medium used in strawberry tissue culture
母液 Solution | 成分 Composition | 濃度（mg/L） Concentration | 母液 Solution | 成分 Composition | 濃度（mg/L） Concentration |
Ⅰ | KNO3 | 1900 | Ⅳ | Na2EDTA | 37.3 |
MgSO4·7H2O | 370 | FeSO4·7H2O | 27.8 | ||
NH4NO3 | 1650 | Ⅴ | VB1 | 0.1 | |
KH2PO4 | 170 | VB6 | 0.5 | ||
Ⅱ | MnSO4·H2O | 16.9 | 煙酸 | 0.5 | |
ZnSO4·7H20 | 8.6 | 肌醇 | 100 | ||
H3BO3 | 6.2 | 甘氨酸 | 2 | ||
KI | 0.83 | Ⅵ | Cacl2·2H2O | 440 | |
Ⅲ | Na2MoO4·2H2O | 0.25 | |||
CuSO4·5H2O | 0.025 | Ⅶ | BA | 0.1～0.3 | |
CocL2 ·6H2O | 0.025 | ||||
Ⅷ | IBA | 0.2～0.7 |
標(biāo)號(hào) | 成份 | 配100ml的母液(200倍)稱取量（mg） | 配1L培養(yǎng)基吸取量(ml) |
1 | NH4NO3 | 33,000 | 5 |
2 | KNO3 | 38,000 | 5 |
3 | KH2PO4 | 3,400 | 5 |
4 | MgSO4·7H2O | 7,400 | 5 |
5 | CacL2·2H2O | 8,800 | 5 |
6 | MnSO4·H2O | 676 | 10 |
7 | ZnSO4·7H20 | 344 | 10 |
8 | H3BO3 | 248 | 10 |
9 | KI | 33.2 | 10 |
10 | Na2MoO4·2H2O | 10 | 10 |
11 | CocL2 ·6H2O | 1 | 10 |
12 | CuSO4·5H2O | 1 | 10 |
13 | FeSO4·7H2O | 556 | 5 |
14 | Na2EDTA | 746 | 5 |
15 | 肌醇 | 2,000 | 5 |
16 | 煙酸 | 10 | 5 |
17 | VB1 | 2 | 5 |
18 | VB6 | 10 | 5 |
19 | 甘氨酸 | 40 | 5 |
心得與體會(huì)
草莓屬于薔薇科草莓屬多年生草本植物,園藝學(xué)上分類屬于漿果類,草莓果實(shí)艷麗,柔軟多汁酸甜可口,芳香濃郁,營(yíng)養(yǎng)豐富的高級(jí)果品,漿果中含糖6%-12%,含各種有機(jī)酸1.0%-1.5%.含蛋白質(zhì)0.4%-0.8%,每一百克果實(shí)中含維生素C50-100毫克,比柑橘高兩倍,比蘋果葡萄高十倍,草莓中還含有其他種類的維生素和磷鐵等礦物質(zhì),無(wú)論從風(fēng)味上來看,還是從營(yíng)養(yǎng)價(jià)值上來看,草莓都當(dāng)之無(wú)愧為果中的上品,所以有人稱草莓為“水果皇后”
通過本次實(shí)習(xí)使我對(duì)草莓的國(guó)內(nèi)外科研發(fā)展史和生產(chǎn)現(xiàn)狀有所了解；對(duì)草莓的種類和品種有初步的認(rèn)識(shí)；對(duì)草莓的對(duì)環(huán)境條件的要求有所了解；對(duì)草莓的繁殖和育苗尤其是草莓的組織培養(yǎng)法有一定的認(rèn)識(shí)；對(duì)草莓的主要病蟲害的及其防治有一定的了解；為我們以后從事草莓方面的工作與研究打下夯實(shí)的基礎(chǔ)。
草莓的國(guó)內(nèi)外科研發(fā)展史和生產(chǎn)現(xiàn)狀
一、草莓的國(guó)外科研發(fā)展史和生產(chǎn)現(xiàn)狀
草莓植物起源于亞洲每周和歐洲，其栽培品種繁多，分布于世界各地，西方各國(guó)大約是在14世紀(jì)末開始栽培林叢莓，15-17世紀(jì)栽培短蔓莓和麝香莓，1714年荷蘭從南美引進(jìn)智利莓，1750年法國(guó)著名園藝家A.Ducaesne將智利莓和深紅莓雜交定名為鳳梨莓，即世界栽培種的誕生。此后在西歐以英法為中心的普遍開展草莓的雜交種的培育，使草莓在世界各地迅速發(fā)展起來。
到1990年全世界共有46個(gè)國(guó)家和地區(qū)生產(chǎn)草莓，世界總產(chǎn)量為2357129噸，美國(guó)草莓的產(chǎn)量為541033噸，居世界第一位，1920年美國(guó)農(nóng)業(yè)部所屬的農(nóng)業(yè)拭驗(yàn)站開始改進(jìn)草莓的總的園藝性狀的育種工作。其中佩茨維爾農(nóng)業(yè)研究中心和馬里蘭州大學(xué)合作進(jìn)行草莓的抗紅中柱病的育種，已選出60個(gè)有抗性的單系。
日本15世紀(jì)前開始食用野生草莓，18世紀(jì)末從荷蘭的西方諸國(guó)引進(jìn)栽培種，19世紀(jì)初從美國(guó)引進(jìn)六個(gè)品種，第二次世界大戰(zhàn)以后日本大量培養(yǎng)了本國(guó)的草莓品種。
在歐洲，1982年意大利的草莓產(chǎn)量居首位，年產(chǎn)量為247000噸，居世界第二位，波蘭居歐洲第二位，年產(chǎn)量為185000噸，居世界第四位。
二、 草莓的國(guó)內(nèi)科研發(fā)展史和生產(chǎn)現(xiàn)狀
我國(guó)16世紀(jì)的《本草綱目》內(nèi)有關(guān)草莓的記載：就地生蔓，節(jié)接生根，每枝三葉，葉有齒劍四五月開花，五月結(jié)實(shí)鮮紅……。
我國(guó)雖然也是野生草莓的發(fā)源地之一，但大果型的草莓大部分從國(guó)外引進(jìn)，而且草莓培育開始較晚，在見到的最早的記載是1915年帝俄僑民從莫斯科引進(jìn)5000棵勝利品種到黑龍江亮子坡栽培，1918年又有一鐵路司機(jī)從高加索引入勝利栽培，1915年在河北由法國(guó)神父從法國(guó)引進(jìn)雞心品種到正定天主教堂（石家莊果樹研究所）栽培。20世紀(jì)50年代沈陽(yáng)農(nóng)學(xué)院（沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)前身）北京植物園從蘇聯(lián)東歐國(guó)家引進(jìn)大量世界各地的品種，河北省農(nóng)林科學(xué)院石家莊果樹研究所從1980年開始搜索草莓品種資源，和開展新品種選育工作，到目前已經(jīng)保存300種國(guó)內(nèi)外的草莓品種，1981年以后，黑龍江，吉林，河北，山西，山東，上海，天津等直轄市的一些科研單位和大專院校陸續(xù)開展了草莓的科學(xué)研究工作，分別對(duì)草莓的品種選育，秧苗繁殖，栽培技術(shù)，形態(tài)生理，病蟲害的防治等方面進(jìn)行了研究。
草莓的種類和品種
草莓植物起源于亞洲、美洲和歐洲，在亞洲有八種，按草莓的基本染色體有二倍體、四倍體、六倍體、八倍體之分。其生理生態(tài)特性各異。
主要種類：野生草莓，西藏草莓，黃毛草莓，東方草莓，西南草莓，五葉草莓，纖細(xì)草莓，西域草莓，智利草莓，橢圓草莓，短蔓草莓，麝香草莓，西美洲草莓。
草莓的栽陪種類繁多，當(dāng)今世界有2000多種，但大面積栽培僅幾十種，我國(guó)目前栽培草莓的品種大體有三部分。一栽培歷史較長(zhǎng)的老品種，二國(guó)內(nèi)選育的品種，三引進(jìn)的國(guó)外品種。有關(guān)草莓的種類和品種參見《草莓生產(chǎn)技術(shù)大全》郝保春主編，中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社出版。
草莓對(duì)環(huán)境條件的要求
對(duì)溫度的要求：草莓植株生長(zhǎng)的適宜溫度為18-23℃。春季生長(zhǎng)如遇到-7℃的低溫會(huì)受凍，-10℃時(shí)大多數(shù)植株會(huì)凍死，根系在2℃開始活動(dòng)，10℃時(shí)開始形成新根根系的最適生長(zhǎng)溫度15-20℃，地上部在5℃時(shí)開始萌芽，莖葉開始生長(zhǎng)到15℃時(shí)為緩慢生長(zhǎng)期，草莓的生長(zhǎng)發(fā)育和光合作用的最適溫度20-25℃，5℃以下是草莓休眠的所需的溫度。
對(duì)光照的要求；草莓不同的發(fā)育時(shí)期對(duì)光照的要求不同，在開花和結(jié)果時(shí)期，和旺盛生長(zhǎng)期適宜在12-15小時(shí)的長(zhǎng)日照，在花芽分化期要求10-12小時(shí)的短日照，和較低的溫度，18小時(shí)的日照下生長(zhǎng)旺盛，但不能形成花芽，甚至不能開花結(jié)果，草莓在花芽分化前經(jīng)受短日照，在花芽分化以后經(jīng)受長(zhǎng)日照處理能促進(jìn)花芽發(fā)育和開花。
對(duì)水分的要求：草莓的整個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)土壤的含水量為60%左右，便可以滿足其生長(zhǎng)發(fā)育的要求。
對(duì)土壤的要求：在砂質(zhì)土壤上如果多施有機(jī)肥，勤澆水草莓著色好，含糖量高。成熟期可提前4-5天，草莓適宜在微酸性和中性的土壤中生長(zhǎng)，要求PH值5.8-6.5PH值在4以下或8以上，就會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)發(fā)育障礙，表層有機(jī)質(zhì)含量達(dá)到1.5%-2%才能生長(zhǎng)良好，才能獲得優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)。
草莓對(duì)土壤中氮、磷、鉀含量有一定要求。
草莓的繁殖與育苗
繁殖方法：匍匐莖分枝繁殖法、新莖分枝繁殖法、組織培養(yǎng)繁殖法、種子繁殖法。
育苗的方法：假植育苗、高山育苗、營(yíng)養(yǎng)缽育苗、無(wú)土栽培育苗、遮光育苗、夜冷育苗。本次實(shí)習(xí)主要應(yīng)用組織培養(yǎng)繁殖育苗。
組織培養(yǎng)法的具體步驟：
1接種分化、選取強(qiáng)壯粗實(shí)的短縮莖，除去葉，切下頂部放入消毒液后，用清水洗凈，在無(wú)菌條件下切取莖尖約3毫米，置入無(wú)菌培養(yǎng)基的三角瓶?jī)?nèi)，放入無(wú)菌室恒溫22-26℃，培養(yǎng)30-75天，培養(yǎng)成1.5-2.0厘米的無(wú)根苗30-50株。
2繼代繁殖、將培養(yǎng)出的無(wú)根苗進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖，分成5-10瓶，培養(yǎng)7-15天，又可以長(zhǎng)滿無(wú)根苗，可以連續(xù)十代。根據(jù)生產(chǎn)需要決定繼代培育次數(shù)。
3生根培養(yǎng)、采用某些激素配成一定濃度和適宜比例的培養(yǎng)液，將無(wú)根苗在三角瓶培養(yǎng)液中培養(yǎng)，可促使其發(fā)根。
4馴化到自養(yǎng)階段、由試管移植到盆內(nèi)，于18-25℃溫度下培養(yǎng)15-20天即成無(wú)病毒苗，再進(jìn)入苗圃培育。
主要病蟲害與防治
引起草莓的主要病害：草莓病毒病、草莓灰霉病、草莓白粉病、草莓炭疽病、草莓黃萎病、草莓蛇眼病、草莓輪紋病、草莓根腐病。
主要蟲害：蠐螬、蚜蟲、紅蜘蛛、葉甲、斜紋葉蛾。
防治：主要采取綜合防治的原理，是檢疫性病蟲害的采取植物檢疫策施，還有生物防治、農(nóng)業(yè)防治、物理防治、化學(xué)防治等。例如對(duì)草莓病毒病的防治采用莖尖組織繁殖法，因病毒是通過維管束進(jìn)行傳播的在莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)還沒有分化出為維管束的部分是不帶病毒的，所以取草莓莖尖1-3毫米的分生組織進(jìn)行培養(yǎng)可得到無(wú)病毒苗。
對(duì)主要的害蟲采用見效快的化學(xué)防治策施。
在做本次實(shí)驗(yàn)的過程中,使我體會(huì)到了什么叫認(rèn)真和細(xì)心,我是一個(gè)粗心的的孩子,對(duì)待事情一直都是馬馬虎虎,做本次實(shí)驗(yàn)需要配制大量的母液,它的需要量和配制培養(yǎng)基時(shí)的放入次序要弄清,一步錯(cuò)誤滿盤結(jié)輸,分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基一定要分清,唯一的差別在于分化培養(yǎng)基內(nèi)附加BA(6-芐基氨基嘌呤)而生根培養(yǎng)基中附加IBA(吲哚乙酸)。另外,培養(yǎng)基的煮沸時(shí)間和溫度一定要把握住，時(shí)間和溫度過高和過低都對(duì)培養(yǎng)基的成分和培養(yǎng)效果有一定的影響，過高可能導(dǎo)致培養(yǎng)基渾濁不清，有些成分可能受熱分解掉了。過低時(shí)培養(yǎng)基的受熱時(shí)間短對(duì)培育苗的生長(zhǎng)發(fā)育有一定的影響。培養(yǎng)基作好以后一定要貼好標(biāo)簽，以防混淆了兩種培養(yǎng)基。在做本此實(shí)驗(yàn)的過程中使我體會(huì)到什么是耐心，在做外植體分化時(shí)，由于草莓的頂梢莖尖比較小，但是還得用鑷子將莖尖的外面的包葉剝?nèi)�，用鑷子將幼葉一一剝?nèi)�，剪取盡可能小的莖尖（０.１－０.３ＭＭ）有時(shí)候由于操作上的失誤造成草莓苗的病菌感染，需要將草莓苗進(jìn)行消毒，時(shí)間和消毒劑的用量一定要謹(jǐn)慎操作，時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致草莓苗的中毒死亡，消毒劑量濃度低消毒不徹底，為了防止草莓苗的感染都在無(wú)菌臺(tái)上進(jìn)行操作，實(shí)驗(yàn)用的鑷子剪刀都要用一次就消毒一次，一般用酒精燈外焰燒幾分鐘就可以了，實(shí)驗(yàn)時(shí)雙手也要進(jìn)行酒精消毒，防止其他外來菌體的污染，再接種草莓苗時(shí)要靠近酒精燈的火焰不可太近也不能太遠(yuǎn)。太近會(huì)使草莓苗受熱過高導(dǎo)致燙傷或燙死，太遠(yuǎn)可能會(huì)導(dǎo)致其他細(xì)菌的污染，試管口的棉塞不能隨意亂放，以防污染。接種完以后將三角瓶放入恒溫箱里進(jìn)行培養(yǎng)，控制好光照、光周期、溫度、時(shí)間。并定期觀察草莓苗的生長(zhǎng)和生根情況，有時(shí)由于沒有將草莓苗插入培養(yǎng)基內(nèi)，生長(zhǎng)一段時(shí)間后基部脫離了培養(yǎng)基，這時(shí)需要將草莓苗重新插入到培養(yǎng)基內(nèi)，必要時(shí)換一個(gè)三角瓶培養(yǎng)基，再進(jìn)行一次外植體莖尖的剪取，千萬(wàn)不可馬虎偷懶大意。本次實(shí)習(xí)使我所學(xué)的知識(shí)與實(shí)踐得到了緊密結(jié)合，獲得了許多實(shí)戰(zhàn)性經(jīng)驗(yàn)，將許多知識(shí)運(yùn)用到實(shí)踐中，獲得更好更高的豐產(chǎn)。在次此實(shí)習(xí)過程中，我院趙巖老師和甄文超教授給予了許多經(jīng)驗(yàn)性的指導(dǎo)，研究生劉雪靜學(xué)姐和其他師兄給予了許多技術(shù)性和實(shí)戰(zhàn)性的指導(dǎo)，在實(shí)習(xí)過程中各位老師學(xué)姐師兄給我講了許多為人處事的道理，為以后走向社會(huì)建設(shè)國(guó)家打下一個(gè)基礎(chǔ)。在次對(duì)各位老師學(xué)姐師兄表示衷心感謝。
總之，通過本次實(shí)習(xí)使我掌握了許多東西，受益匪淺。