2001年，主演了表現(xiàn)廣西桐鄉(xiāng)文化的電視輕喜劇《都市山歌》，該劇以音樂(lè)舞蹈為表現(xiàn)形式，她在劇中飾演淳樸美麗侗鄉(xiāng)的姑娘寶妮。

2002年，首次出演古裝劇《浪跡天涯》，該劇講述了江南才子秦澗泉游歷天下、仗義行俠的故事，而她則飾演了性格豪爽的溫柔，與秦澗泉互有好感；隨后，在黃海冰、寧?kù)o、張靜初主演的歷史武俠劇《英雄》中飾演靖南王郡主朱芷菁；還與張智霖、朱茵合作出演古裝武俠劇《如來(lái)神掌》，扮演柳中原獨(dú)女柳明鸞，活潑可人，對(duì)歐敬豪死心塌地。

2003年，出演了陸毅、林心如主演的都市情感劇《男才女貌》。

2004年，她出演了講述花樣游泳隊(duì)的都市情感劇《出水芙蓉》，在劇中飾演上海體院花樣游泳隊(duì)隊(duì)員葉佳，聰穎美麗但卻自負(fù)的女孩；接著又在以太極拳為題材的古裝劇《太極英雄》中飾演名滿蘇杭的頭號(hào)美人談侃侃；同年，出演了由孫興及崔智友主演、翻拍自1991年純愛日劇《101次求婚》的電視劇《第101次求婚》。

2006年，在張家輝、蔡琳主演的古裝劇愛情輕喜劇《新醉打金枝》中飾演升平公主的貼身侍女劍眉；同年，與胡歌、何潤(rùn)東等人合作出演古裝劇《少年楊家將》，飾演遼朝蕭太后之女耶律瓊娥，晉封“銀鏡公主”，最終嫁給失憶的四郎楊延輝。

2007年，出演范冰冰、馬景濤主演的古裝神話電視劇《封神榜之鳳鳴岐山》，在劇中飾演妲己的姐妹“琵琶精”胡喜媚；還與張智堯、張智霖共同出演了央視電影頻道出品的數(shù)字電影《陸小鳳傳奇之大金鵬王》。

2015年，參演復(fù)出后的首部電視劇《御姐歸來(lái)》，她在這部由安以軒、朱一龍主演的都市情感輕喜劇飾演富家女胡娜。11月，在職場(chǎng)情感劇《北上廣不相信眼淚》中飾演“微信女孩”妙妙，戲份不多卻引人關(guān)注。同時(shí)還受邀加盟浙江衛(wèi)視《我不是明星》節(jié)目，成為該節(jié)目的新晉選手，首次登臺(tái)的她在節(jié)目中表演了各種舞蹈。參演電影《情定河州》。

2006年2月，吳佳尼與臺(tái)灣男演員馬景濤在拍攝電視劇《封神榜之鳳鳴岐山》時(shí)日久生情，同年4月相戀，6月26日在上海訂婚。

2007年2月14日，在情人節(jié)同時(shí)也是馬景濤生日當(dāng)天，吳佳尼與馬景濤在上海注冊(cè)結(jié)婚，吳佳尼是馬景濤的第二任妻子，比馬景濤小21歲，此時(shí)她已懷有身孕。6月6日中午，吳佳尼順利產(chǎn)下一子，取名為馬世天。

2009年2月2日，吳佳尼生下第二個(gè)兒子馬世心。

2015年10月27日，馬景濤微博曬出和妻子吳佳尼、兩個(gè)兒子拍婚紗照的幸福照片。

2015年12月2日，吳佳尼與馬景濤在節(jié)目《我不是明星》補(bǔ)辦婚禮。

2017年3月30日，吳佳尼與馬景濤離婚，結(jié)束10年婚姻生活。

吳佳尼是個(gè)美麗可愛的上海姑娘，有著80后女孩特有的青春靚麗外形和俏皮風(fēng)格（新浪網(wǎng)評(píng)） 。

吳佳尼身材性感火辣，長(zhǎng)相非常甜美（網(wǎng)易娛樂(lè)評(píng)） 。

她有著清秀乖巧又帶點(diǎn)小小可愛精明的長(zhǎng)相，一直走清秀小女生路線的她，出演過(guò)《浪跡天涯》《如來(lái)神掌》《新醉打金枝》等多部古裝劇，而她在《男才女貌》《出水芙蓉》等都市劇中也有不錯(cuò)表現(xiàn)（娛樂(lè)圈評(píng)） 。