1976年6月29日，馬伊琍出生于上海市虹口區(qū)。15歲時，馬伊琍參加上海電視臺的綜藝舞蹈隊，正式自食其力自己賺取學(xué)費。

1993年，馬伊琍被選中主演電影《劉海粟》，那是她的第一次觸電經(jīng)歷，收獲800元片酬。

1994年，馬伊琍考入上海戲劇學(xué)院94級表演系本科。

1996年，馬伊琍與保劍峰、陳龍、高曙光、張雅琳共同出演了電視劇《真空愛情記錄》，講述了一群大學(xué)畢業(yè)生為了工作和愛情奮斗的故事。

1998年，馬伊琍畢業(yè)于上海戲劇學(xué)院，畢業(yè)后參演了第一部改編自陜西駐滬作家李春平同名小說的電影《玻璃是透明的》，飾演“小丫子”。同年，其出演了第一部古裝電影《孔乙己》。

2000年，通過出演《黑洞》提升了表演事業(yè)。同年，在電視劇《前世今生》中飾演美貌且氣質(zhì)超凡的秦婉瑩。

2001年，出演電視劇《白天睡覺的女人》中的李秀。同年，在電影《西施眼》中飾演施雨，該片在2002年美國夏威夷國際電影節(jié)中獲評審團大將及亞洲最佳電影。

2002年，因出演電視劇《還珠格格Ⅲ之天上人間》中的紫薇一角而被大眾所熟知。

2004年，出演了由黃磊指導(dǎo)的《天一生水》，在劇中飾演一個混血姑娘明妮。

2005年，在張黎導(dǎo)演的電視劇《錦衣衛(wèi)》中出演了傾國美人客印月。

2006年，參演的《喬家大院》在央視熱播，其扮演的“江雪瑛”收獲了更多的觀眾和粉絲。

2007年，因出演由趙寶剛指導(dǎo)的青春勵志電視劇《奮斗》而名聲驟起，同年6月底，馬伊琍簽約了內(nèi)地影視巨擎橙天娛樂。

2008年，因拍攝電視劇《為誰心動》無悔剃光了頭。同年，其憑借影片《江北好人》，戰(zhàn)勝了李冰冰、范冰冰兩位候選人，成為了長春電影節(jié)影后。

2009年，馬伊琍與佟大為共同出演了電視劇《婚姻保衛(wèi)戰(zhàn)》。同年，出演的首部反映豫商故事的電視劇《經(jīng)緯天地》在CCTV-8播出，這也是她繼《喬家大院》之后首次登陸央視，劇中扮演尚達志的妻子順兒。

2010年，與涂松巖合作主演都市題材電視劇《雙城生活》，她在劇中塑造的北京大妞郝京妮，受到了網(wǎng)友的普遍好評。憑借該劇，馬伊琍獲得國劇盛典2011年度最佳女演員。

2013年年初，馬伊琍與杜淳、劉莉莉、陳思斯等合作出演電視劇《青春期撞上更年期2》，此外，還客串了電影《不二神探》，并且徹底顛覆以往的形象痛罵文章，成為了影片一大看點。

2013年，首當制片人的馬伊琍與首次當導(dǎo)演的丈夫文章合作了電視劇《小爸爸》。

2015年，出演了公路犯罪片《未擇之路》。11月7日，在電視劇《北上廣不相信眼淚》中飾演潘蕓，憑該劇獲得第19屆華鼎獎中國百強電視劇最佳女主角。

2016年9月，與陳建斌合作主演都市幽默劇《中國式關(guān)系》，飾演美女建筑設(shè)計師江一楠。

2017年，主演文章執(zhí)導(dǎo)的諜戰(zhàn)劇《剃刀邊緣》，劇中飾演關(guān)海丹。同年參演《建軍大業(yè)》，飾演向警予角色。12月，馬伊琍入選“最美表演”2017年度十大優(yōu)秀演員。

2017年12月2日，馬伊琍憑借《我的前半生》榮獲2018愛奇藝尖叫之夜“年度藝人”稱號。

2018年1月1日，憑借《我的前半生》獲得2017國劇盛典年度實力劇星獎。1月31日，“2017中國慈善名人榜TOP30”揭曉，馬伊琍位居第二十二名。2月，馬伊琍出任電影《金錢世界》中國推廣大使。同年，參演的電影《找到你》上映。6月16日，憑《我的前半生》獲第24屆上海電視節(jié)白玉蘭獎最佳女主角。6月16日，參加第21屆上海國際電影節(jié)開幕式。7月14日，參加綜藝節(jié)目《朗讀者》。

婚姻

2008年，相差8歲的馬伊琍和文章這對“姐弟戀”結(jié)婚，與眾多明星奢華婚禮不同，馬伊琍和文章的結(jié)合只是一起領(lǐng)了證。

2014年3月28日，文章被曝出婚內(nèi)出軌女星姚笛；3月31日，馬伊琍回應(yīng)“且行且珍惜”。

2014年7月1日，媒體報道文章和馬伊琍夫妻兩人在夏威夷度假，似乎感情有回暖的跡象。

子女

2008年9月20日，文章和馬伊俐的女兒文君竹出生。

2014年春節(jié)期間，馬伊琍為文章產(chǎn)下二胎。

2003年，馬伊琍加入中華骨髓庫，擔任了“中華愛心大使”。

2009年，馬伊琍獲得了2009年度“中國國際年度綠色風(fēng)云人物”，以表彰她在環(huán)保、低碳方面所做出的成績。

2010年6月26日，文章、馬伊琍夫婦在文章生日當天，共同發(fā)起關(guān)注自閉癥兒童的“We Can”藝術(shù)慈善計劃。

2011年5月份，馬伊琍代言了由鄧飛等媒體人發(fā)起的“免費午餐”公益項目，旨在為貧困地區(qū)的孩子提供營養(yǎng)午餐。

2011年，馬伊琍拍攝公益寫真，呼吁社會關(guān)注白血病兒童。5月份，馬伊琍代言了由鄧飛等媒體人發(fā)起的“免費午餐”公益項目，旨在為貧困地區(qū)的孩子提供營養(yǎng)午餐。

2012年5月17日，天使媽媽團隊長沙成員“淘媽”通過確認，天使基金小飛專用賬戶已收到來自馬伊琍和白百何的捐款。其中，馬伊琍捐款四萬元、白百何捐款十萬元。

2015年6月12日，國際特殊奧林匹克東亞區(qū)融合慈善籌款晚宴在上海舉行，馬伊琍作為特奧形象大使助拍某品牌紅底鞋，最終以十萬八千元高價成交，這也是馬伊琍成為特奧會大使后第一次亮相。

2016年1月3日，42歲馬伊俐現(xiàn)身安徽衛(wèi)視國劇盛典，身穿裹身皮裙凸顯完美胸型，現(xiàn)場十分搶鏡。此次《國劇盛典》上林心如、馬伊琍、海陸三代紫薇同臺亮相，三人都是以清純路線出道，而此次亮相，林心如中門大開，馬伊琍緊身皮裙爭秀性感。

馬伊琍現(xiàn)實生活中就是一位十分獨立、自由、有想法的現(xiàn)代女性代表。不光是日常生活中的瑣事，拍戲時她也依然能夠表達自己的想法與導(dǎo)演溝通（騰訊娛樂評）。

從《奮斗》中的“夏琳”到《婚姻保衛(wèi)戰(zhàn)》中的“李梅”，再到《雙城生活》中的北京大妞“郝京妮”，一路走來馬伊琍留下了許多難忘的熒幕形象。在《風(fēng)和日麗》中，馬伊琍飾演 “清純女學(xué)生”，從18歲一直演到40多歲，憑借純熟演技和累積多年的表演經(jīng)驗，無論是充滿童真的少女時代，還是飽受人生磨礪的中年時代，馬伊琍都能把 “ 楊小翼 ” 這個人物演繹得精彩到位（騰訊娛樂評）。

她是國內(nèi)中最有文化底蘊的女演員（石康評）。

她對人物的感覺把握準確，十分認真敬業(yè)（趙寶剛評）。