2003年，在高希希執(zhí)導(dǎo)的電視劇《歷史的天空》中飾演反一號“萬古碑”，為人所熟知。

2004年，參演電視劇《搭錯車》，飾演反一號蘇民生。

2007年，出演高希希執(zhí)導(dǎo)的倫理情感劇《男人底線》，飾演陰冷頑固的趙通達(dá)。

2007年，參演導(dǎo)演高希希執(zhí)導(dǎo)的電視劇《紙醉金迷》，飾演一個投機(jī)倒把的奸商。

2009年，在古裝劇《三國》中成功飾演劉備。

2010年，于和偉、羅海瓊領(lǐng)銜主演親情劇《幸福在路上》。

2010年，蘇巖、于和偉、王麗坤、沙溢等聯(lián)袂主演心理諜戰(zhàn)劇《青盲》，飾演張海峰。

2010年10月18日，林永健、何賽飛、辛柏青、于和偉主演的47集電視連續(xù)劇《老馬家的幸福往事》舉行北京電視臺首播發(fā)布會。

2011年，與楊童舒、李依曉、霍青等主演都市親情大戲《天下人家》，劇中，李依曉和于和偉飾演兄妹。

2011年，獲南方盛典最佳男演員獎《幸福在路上》。

2011年，與劉威葳、劉鈞、呂中、趙亮等演員聯(lián)合出演家庭情感電視連續(xù)劇《大家庭》。

2012年5月22日獲得MSN星月年度最具價(jià)值男演員獎。

2013年，于和偉、王麗坤領(lǐng)銜主演抗日諜戰(zhàn)劇《零下三十八度》，劇中飾演的“非典型”特工。

2013年，由劉雪松導(dǎo)演，于和偉、王麗坤、宋春麗等演員領(lǐng)銜主演都市時(shí)尚情感劇《愛的多米諾》，在劇中飾演玩具設(shè)計(jì)師戴骨順。

2013年，于和偉、劉濤領(lǐng)銜主演的都市情感勵志大劇《下一站婚姻》，劇中于和偉變身“恐婚族”，對有著同樣離異經(jīng)歷的單身母親“鄧草草”（劉濤飾）暗生情愫。

2014年，于和偉主演《刑警隊(duì)長》。于和偉在劇中飾演男主角刑警隊(duì)長顧銘，率領(lǐng)隊(duì)友屢破大案保衛(wèi)城市安全，還是一位愛妻兒孝順父母的好男人。

2015年，于和偉飾演《搜索連》中鐵血師長吳休葆，被贊演的尸體都有不一樣的味道。

2015年，于和偉主演《追擊者》中反一號曹若飛。

2015年，于和偉在大型古裝神話劇《封神》中飾演姜子牙一角。

2015年8月9日，于和偉憑借《下一站婚姻》獲第十七屆華鼎獎當(dāng)代劇最佳男演員獎。9月8日，于和偉紅色西裝亮相時(shí)尚星秀盛典，并獲得年度最具實(shí)力男演員獎。同年，主演的《警花與警犬》開機(jī)，他在劇中飾演女子訓(xùn)犬隊(duì)隊(duì)長杜飛。

2016年3月2日，于和偉出演的古裝大劇《軍師聯(lián)盟》在橫店舉行開機(jī)儀式后立馬投入緊張的拍攝。

2017年，在電影《建軍大業(yè)》中飾演陳獨(dú)秀。

2017年10月，于和偉領(lǐng)銜出演的電視劇《絕不放手》在江蘇常州舉行了開機(jī)儀式。12月5日，參演的電視劇《警花與警犬之再上征程》在山東衛(wèi)視播出。

2018年1月1日，獲得2017國劇盛典年度匠心劇星獎。1月20日，參加“百花迎春——中國文學(xué)藝術(shù)界2018春節(jié)大聯(lián)歡”。4月，獲第31屆飛天獎優(yōu)秀男演員提名。4月16日，參演的電視劇《下一站，別離》開播。4月18日，為電視劇《下一站，別離》演唱的插曲《青春告別詩》MV上線。同日，主演的電視劇《決勝法庭》在廈門開機(jī)。4月28日，參演的電影《幕后玩家》上映。2018年，憑借《大軍師司馬懿之軍師聯(lián)盟》獲得第24屆上海電視節(jié)舉行“白玉蘭獎”最佳男配角。6月29日，參加綜藝節(jié)目《向往的生活》第二季。7月6日，參演的電視劇《獵毒人》播出。8月10日，參演的電影《一出好戲》上映。

1991年于和偉與宋林靜相戀，1996年，兩人同時(shí)畢業(yè)，并被同時(shí)招進(jìn)了南京軍區(qū)前線話劇團(tuán)。他們相識19年、結(jié)婚13年。

2015年12月23日，作為嘉賓出席了第30屆中國電視劇飛天獎典禮。

于和偉拍戲特別認(rèn)真和鉆研，對藝術(shù)一絲不茍（王麗坤評價(jià)） 。而且演技精湛（搜狐娛樂）。于和偉小鼻子小眼睛的，卻讓人有種很信任的感覺（搜狐娛樂）。于和偉飾演的劉備，演出了他的特點(diǎn)，他有穩(wěn)重的一面，有一代君王的英姿，而面對國家的危難，他有睿智的一面，我不認(rèn)可他的江山是哭出來的這種概念（高希希評） 。