1982年，王伯昭出演人生中第一部影片《筆中情》，因在劇中有不錯(cuò)的表現(xiàn)，該電影也成為王伯昭的成名作。在這部以年輕書法家的愛(ài)情為題材的古裝片里，王伯昭扮演的書法家趙旭之的名字分別取自三位歷史上著名書法家的姓名：趙孟�、张旭、王羲�?。

1984年，王伯昭與演員六小齡童、馬德華合作出演了經(jīng)典電視劇《西游記》，因在劇中飾演白龍馬人型被大多數(shù)觀眾所認(rèn)識(shí)。同年，與演員高維明、謝芳分別合作出演電影《一個(gè)女人的命運(yùn)》、《清水灣，淡水灣》，在劇中飾演黃立秋和小張。1986年，王伯昭接連出演電影《俠女十三妹》、《文成公主》和電視劇《不知其名》，并在劇中有不錯(cuò)表現(xiàn)。

1991年，王伯昭與李安導(dǎo)演合作，出演電影《推手》，該劇圍繞一個(gè)移民美國(guó)家庭發(fā)生的一系列故事，表現(xiàn)了傳統(tǒng)的中國(guó)文化與美國(guó)的風(fēng)土人情之間的沖突。

1994年，王伯昭與演員林俊賢合作出演古裝電視劇《唐太宗李世民》，在劇中飾演李建成。

1997年，王伯昭與 張國(guó)立，陳亞蘭，蘇有朋，陳志朋等多位演員合作主演古裝愛(ài)情電視劇《一品夫人芝麻官》。

1999年，王伯昭出演電視劇《春光燦爛豬八戒》，在劇中飾演玉皇大帝。同年6月，與張晨光、于佳卉合作出演電視劇《王寶釧與薛平貴》，在劇中飾演蓋世文。2002年，王伯昭在由張恨水同名小說(shuō)改編的民國(guó)愛(ài)情劇《金粉世家》飾演白雄起。該劇講述了十九世紀(jì)二十年代，北洋軍閥內(nèi)閣總理之子金燕西和清貧女子冷清秋之間的愛(ài)情故事。

2004年，王伯昭與演員張衛(wèi)健、謝霆鋒合作出演古裝電視劇《小魚兒與花無(wú)缺》，在劇中飾演江別鶴。

2005年，由《金粉世家》原創(chuàng)班底打造的電視劇《金色年華》開播，王伯昭與吳競(jìng)、黃梅瑩、舒耀瑄等演員合作，在劇中飾演許洪均 。

2006年，王伯昭參演電視劇《局中局》，劇中扮演方立新。

2010年，王伯昭與演員陳浩民、寇振海合作出演電視劇《秦香蓮》，在劇中飾演陳恂。

2011年，王伯昭在《命運(yùn)交響曲》中飾演宋承昊(遲帥飾)的父親宋禮源，劇中二人會(huì)上演多場(chǎng)“劍拔弩張”的對(duì)手戲，此次是王伯昭與遲帥繼《新京城四少》后，再次合作扮演父子。

2012年，王伯昭與沈星浩、李寶能導(dǎo)演合作，出演電視劇《同在屋檐下》，劇中飾演洛銘。同年，與李璟、李東恒等青年偶像演員合作出演電視劇《鐵血男兒夏明翰》，劇中飾演章府老爺章炎，面對(duì)章承基、章妙菱(蘇青飾)一雙兒女皆被夏明翰攪的反目成仇，疼惜憐憫與恨鐵不成鋼的矛盾心理讓他一次次陷入不仁不義。

2013年，王伯昭參演由導(dǎo)演馬功偉執(zhí)導(dǎo)電視劇《更年期的戰(zhàn)爭(zhēng)》，該劇講述了一位從海外留學(xué)歸來(lái)的青年才俊任何與女強(qiáng)人母親之間的情感碰撞和摩擦。

2014年，紀(jì)念鄧小平誕辰110周年的電視劇《歷史轉(zhuǎn)折中的鄧小平》在央視一套開播。該劇講述1976年-1984年這段重要?dú)v史時(shí)期。王伯昭在劇中飾演榮毅仁。同年，在電視劇《嫁個(gè)老公過(guò)日子》中飾演厚偉毅。

2015年6月6日，在江蘇宜興參加人物傳記文藝片《顧景舟》的拍攝開機(jī)儀式。

2018年3月23日，參加《天天向上》。

王伯昭不僅在演技方面表現(xiàn)出色，而且還擅長(zhǎng)書法。閑暇之余，潛心筆墨，頗有成就。在自己首部電影《筆中情》中扮演男主角趙旭之，把自己書寫的“飛舞”二字，呈現(xiàn)在觀眾面前，也展示了他在書法領(lǐng)域的造詣。

徐少華回憶說(shuō)，盡管戲份少，王伯昭在飾演小白龍時(shí)卻沒(méi)少下功夫，吃了很多苦。因?yàn)橛泻芏辔鋺�，王伯昭在武�?《西游記》中二郎神的扮演者)的指導(dǎo)下苦練功夫，認(rèn)真琢磨每一招每一式，很多時(shí)候都是別人拍攝完了他還在練習(xí)。20年過(guò)去了，《西游記》還是眾多電視臺(tái)寒暑假的保留劇目，對(duì)此，王伯昭感嘆自己很幸運(yùn)能在這樣一部具有恒久生命力的電視劇中出演角色，并笑著對(duì)身邊的徐少華說(shuō)：“你該知足了，一個(gè)唐僧讓你輝煌了一輩子。 ”（演員徐少華評(píng)論）

據(jù)了解，在《跟年期的戰(zhàn)爭(zhēng)》第一集中，王伯昭就有不少戲份，他透露到，他第一個(gè)面對(duì)的就是一個(gè)非常難纏的有更年期癥狀的女人，至于到底是誰(shuí)，發(fā)生了什么，王伯昭則閉口不談。導(dǎo)演馬功偉也對(duì)王伯昭的演技大加肯定，“王老師演了很多年戲了，早就是一名戲骨了，在現(xiàn)場(chǎng)根本不用我指導(dǎo)，而且還會(huì)指導(dǎo)其他年輕演員演戲，非常專業(yè)”。（導(dǎo)演馮功偉評(píng)論）

2004年9月，在懷柔拍攝電視劇《小魚兒與花無(wú)缺》的過(guò)程中，王伯昭認(rèn)為張衛(wèi)健、謝霆鋒假戲真做，故意毆打了他，致使其多處受傷。被打傷者王伯昭委托其代理人北京京都律師事務(wù)所的吳昊、張振祖兩位律師，正式向北京市第二中級(jí)人民法院遞交起訴書，以謝霆鋒等兩被告侵權(quán)為由，請(qǐng)求法院判令謝霆鋒、張衛(wèi)健向王伯昭公開書面賠禮道歉;要求兩被告共同賠償王伯昭經(jīng)濟(jì)損失3萬(wàn)元;被告張衛(wèi)健賠償原告精神損失60萬(wàn)元，被告謝霆鋒賠償原告精神損失40萬(wàn)元。王伯昭在他的起訴書中說(shuō)：他和被告張衛(wèi)健、謝霆鋒都是電視劇《小魚兒與花無(wú)缺》劇組演員。2004年9月18日19時(shí)許，在實(shí)際拍攝過(guò)程中，兩被告經(jīng)過(guò)策劃和預(yù)謀，借表演名義，共同故意對(duì)他進(jìn)行毆打，致使他左大腿、左腎、左面部等多處受傷，造成頻發(fā)性心房早搏。根據(jù)北京市公安局法醫(yī)鑒定中心出具的傷檢《鑒定書》鑒定：左大腿軟組織挫傷青紫面積大腿外側(cè)1.5手掌大小，左膝上方1手掌大小，左大腿內(nèi)側(cè)1手掌大小，左腎輕度挫傷，左面部軟組織損傷，”參照人體損傷鑒定標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定符合輕微傷(上限)”。對(duì)于劇情需要是否可以成為謝霆鋒、張衛(wèi)健打傷王伯昭而不承擔(dān)法律責(zé)任的理由，中國(guó)人民大學(xué)民法學(xué)教授趙中孚在接受記者采訪時(shí)表示，人身權(quán)是《憲法》賦予公民的基本權(quán)利，劇情的需要不能作為侵犯公民人身權(quán)的借口，任何一個(gè)領(lǐng)域也不能豁免對(duì)人的傷害責(zé)任。中國(guó)政法大學(xué)教授阮齊林認(rèn)為，從本案法醫(yī)鑒定書的損害后果看，至少兩被告存在嚴(yán)重過(guò)失。2005年12月，王伯昭拍戲被打一案，由北京市第二中級(jí)人民法院進(jìn)行公開宣判。法院認(rèn)定被告張衛(wèi)健、謝霆鋒在民事上有重大過(guò)失，但由于王伯昭未能提供相關(guān)經(jīng)濟(jì)損失及精神損害的證據(jù)，故駁回原告王伯昭的訴訟請(qǐng)求。12月30日，王伯昭發(fā)聲明表示對(duì)法庭判決基本認(rèn)同。至此，這場(chǎng)沸沸揚(yáng)揚(yáng)的拍戲打人致傷，引起全國(guó)關(guān)注的案件也告終了。