據(jù)說源三郎是個(gè)相當(dāng)認(rèn)真的人。為武州日野宿北原（現(xiàn)在東京都日野市日野本町）八王子千人同心(官名)世話役井上藤左衛(wèi)門的三男。哥哥井上松五郎則是和父親一樣為千人同心(官名)。

        舉例來講，在壬生的沖田總司與孩子們游玩時(shí)，井上恰巧路過，總司立刻發(fā)出“又要去練習(xí)了啊，真熱心呀”的聲音，井上立刻責(zé)備他“既然明白練習(xí)有益的話就好了”等小故事。另外八木為三郎說過“井上那時(shí)大約四十歲，是位異常沉默但人卻相當(dāng)好的人”等話。有著雖然沉默但品格卻相當(dāng)溫厚的性格，在年輕隊(duì)士中相當(dāng)有人望。但一方面卻有著頑固的一面，是個(gè)只要話一出口就不輕易改變的人。

        弘化4年（1847年）時(shí)、源三郎進(jìn)入當(dāng)時(shí)位于多摩正在擴(kuò)張的天然理心流劍術(shù)第三代宗家?近藤周助的道場(chǎng)。后他也在土方歲三的姐夫佐藤彥五郎為了天然理心流出外練習(xí)所設(shè)的道場(chǎng)中與土方一起練習(xí)劍術(shù)。源三郎與近藤勇是師兄弟，所以兩人在這段時(shí)期有著親密的往來和友情。 萬延元年（1860年），井上得到免許皆傳的身份。

        六番隊(duì)長井上源三郎 (1829 井上源三郎誕生)(鳥羽伏見慘敗，新選組副長助勤山崎烝，井上源三郎戰(zhàn)死) 在文政12年3月1日,多摩郡日野宿的八王子同心?井上藤左衛(wèi)門(松五郎)的第三個(gè)男兒在多摩郡日野投宿處出生。井上家的祖先在甲斐?武田家,桶狹間的斗爭以后在駿河今川家的家臣可以使用了。 在德川家作為同多摩郡日野宿的八王子被以武田家的遺臣為中心武田家滅亡以后結(jié)成了的半師半農(nóng)的心可以使用了。兄弟,在5個(gè)人,次男的松次郎繼承井上家,并且繼承松五郎了名字。源三郎在正在八王子附近扎根的理心天然的式的近藤周助和弘化4(1846)大約的年齡,父親,哥哥一樣入門。在佐藤彥五郎在公寓擁有了的道場(chǎng)學(xué)劍了。對(duì)劍術(shù)的練習(xí)熱情,并且據(jù)說當(dāng)農(nóng)活疏忽了的時(shí)候。嘉永元年に目錄、萬延元(1847)年には免許皆伝となった。NHK劇照參加文久3(1863)年,流浪武士隊(duì)上訪首都。新撰隊(duì)組成后來也作為試衛(wèi)館一門的年紀(jì)最大者做完對(duì)外的交涉的工作了。 在副長助勤務(wù),6年隊(duì)頭目工作。帶領(lǐng)10名的土方隊(duì)的別働隊(duì),并且活躍于池田屋案件,并且被賜予17輛的獎(jiǎng)賞錢。被作為見廻組格慶應(yīng)3年(1867)幕臣在6一年的月索取,并且和土方歲三一起在那個(gè)年的十月江戶下來,并且正募集隊(duì)士。侄子的井上泰助也由于這時(shí)的招募入伍了。

        鳥羽/伏見的斗爭慶應(yīng)4年(1868)在1月3日開始。新選組正鋪陣地的伏見奉行所起火,并且新選隊(duì)到淀方面退卻了。以及,在淀千代松的激戰(zhàn)中,被對(duì)槍彈打,并且,在4月5日,戰(zhàn)死。享年40歲。沉默寡言,并且具有敦厚性格,并且據(jù)說當(dāng)來自年輕隊(duì)士的聲望厚了的時(shí)候。有頑固的方面,并且這有了時(shí)分據(jù)說當(dāng)當(dāng)一回開始說的時(shí)候甚至杠桿不工作的時(shí)候。井上源三郎，新選組六番組長，作為試衛(wèi)館的元老級(jí)人物，與近藤、土方、沖田感情深厚，比其他人都年長，近藤勇一直視其為兄長，為人敦厚忠實(shí)，頗有長者風(fēng)范，照顧小輩更是不遺余力，大多數(shù)時(shí)候都在扮演著好好先生。承擔(dān)著做菜煮飯、端茶送水，掃灑的工作，并樂此不疲，享受著其中的樂趣，低調(diào)的作為，常被誤認(rèn)為是仆人[山南就是其中一個(gè)，若非親見其單人制服左手受傷山口一（即后齋藤一）會(huì)一直誤認(rèn)]，可以想見他的慈眉善目，溫柔性情。近藤的身邊，井上與沖田一老一少，總是隨侍在側(cè)，幾乎寸步不離，井上一直照顧著倆人的起居，從試衛(wèi)館起就是如此。

        沖田未得重病前，不改小孩子的心性，對(duì)其極為依賴，總是粘在身邊，井上在新選組勢(shì)力日漸大增后，貴為六番組長，依舊舊習(xí)難改，不愿將這些事假他人之手，事事親力親為，不放心近藤外出，自己不在身邊，近藤只好不厭其煩地一再重申：“您放心，有新的隊(duì)士保護(hù)，您還是好好休息。真的沒關(guān)系的，您別擔(dān)心�！睕_田天賦異稟，曲高和者必寡，池田屋一役更是聲名大振，（殺戮漸多，身心不堪重負(fù)，心下感慨良多，亦有其始知絕癥在身，不久于人世的原因在，個(gè)性變得深沉難測(cè)，對(duì)人性思考過后有了自己的見解，成熟穩(wěn)重了許多，大多數(shù)時(shí)節(jié)緘口沉默。）未免讓人產(chǎn)生距離感，嫌其孤高太過，目下無塵，有些冰，令人肅然起敬極為神往而不敢深交。

         井上平庸樸實(shí)，也許在天才面前，誰都顯得暗淡，只是多得了一份可以跨越一切障礙的親切，就足以讓他不平凡了。如果沖田是冬雪純凈無瑕，內(nèi)心清澈，那么井上就是春陽溫暖和煦，內(nèi)心熾熱。井上與齋藤一樣，并不喜多言，行事不多張揚(yáng)，齋藤就像藏于背后的出鞘劍，殺氣逼人，顯得陰暗，井上則不然，他就像久未開鋒的匣中劍，總是聚斂氣息，顯得平和。不同于齋藤羨慕他人的熱鬧，又害怕光熱灼傷的遠(yuǎn)離，井上純粹是喜歡看到歡樂的喧鬧，大家盡情嬉鬧就是井上最大的滿足。像孩子般笑著的沖田會(huì)突發(fā)奇想地提出些怪異的問題，引發(fā)大家熱烈的討論，他并沒有插嘴，只是靜靜地聆聽，低頭才發(fā)現(xiàn)沖田正拉著自己的衣角撒嬌，面對(duì)一臉乞求，向自己征求答案的沖田，井上總是這樣笑得溫煦而滿足，讓人忘記他是身為劍士而存在的事實(shí)，忘了他亦深具威脅性。如果沒有動(dòng)蕩的時(shí)局，沒有戰(zhàn)爭，沒有新選組，井上會(huì)一直在那個(gè)窮道場(chǎng)里，每天雞鳴前，起床，提水、煮飯、擦地……，雞鳴后，與美津（沖田的姐姐）一起把賴床的近藤、沖田、土方叫起來，一天很簡單地開始，很簡單地結(jié)束，這樣的日子平板而又單調(diào)，周而復(fù)始，但已經(jīng)很幸福，他是知足的人，擁有這就夠了。

         那夜大雪，萬籟俱寂，只聽得“啪啪”的聲響，天亮?xí)r分大雪方霽，積雪還很厚，才發(fā)現(xiàn)不堪大雪重負(fù)的樹枝全斷了，要變天了，是注定，是天意。井上極其疼愛近藤周平（近藤勇的養(yǎng)子，后因脫逃而與近藤脫離這層關(guān)系，改回本姓，但仍保有“周平”這個(gè)名字），對(duì)他給予最多的愛護(hù)。為其意志不堅(jiān)脫逃下跪求情，總是溫言安慰，讓周平振作，引薦沖田作周平的劍術(shù)老師。伏見戰(zhàn)役，因局長近藤鳥羽被暗算中槍傷重，退居京都與重病的沖田一起，副長土方暫代其職，領(lǐng)導(dǎo)新選組沖鋒陷陣。此一役慘烈無比，新選組孤軍深入，拼死血戰(zhàn)，井上為救膽怯不前而被困于戰(zhàn)壕的近藤周平躍出陣地，引開敵人而被亂槍掃射，多處要害被擊中，眾人搶回奄奄一息的他，他望著周平：“你要記住，你是近藤家的孩子，要勇敢，要活下去。”之后就此閉上了眼睛。

        眾人嚎哭慟天，齋藤像瘋了一樣，一人率先沖進(jìn)敵陣，連殺數(shù)十人，銳不可當(dāng)，他要復(fù)仇！為他們最可敬可愛的源三郎復(fù)仇！眾隊(duì)士緊隨其后，也殺將過去。每個(gè)人心頭被憤懣、悲傷壓得喘不過氣來，唯有復(fù)仇方得以平息纏繞在心里的這種痛苦。沖吧！沖吧！天也被血色染紅了。深夜，近藤還未睡，這將又是一個(gè)不眠夜。

        突然，他看見了井上走進(jìn)來，含著熱淚：“我回來了�！苯�藤詫異問：“他人呢？為什么只有你一個(gè)？”井上回答：“是我太心急，想早點(diǎn)回來，就提前了些�！苯�藤突然領(lǐng)悟，眼前的井上不過是幻像，一個(gè)魂魄，是留戀讓他顯靈來道別，今后便是陰陽相隔，再不得見了，不禁流下了眼淚；“鬼是不能哭的�！本�上笑了，眼底還有淚光，那影像漸漸淡了，被清晨的霞光包圍，就此融進(jìn)光里消失不見了。上天又收回了一個(gè)靈魂。

        文久2年2月，與近藤和土方一起進(jìn)入由清河八郎所策畫組織的浪士組。文久3年9月，在肅清芹澤鴨一派后，成為副長助勤，以后繼續(xù)擔(dān)任新選組的干部。因?yàn)榻?jīng)常輔助同鄉(xiāng)兼同門的局長近藤和副長土方，所以獲得他們大大的信任。在隊(duì)內(nèi)的主要工作則是擔(dān)任對(duì)外的職務(wù)以及招待要人。

        元治元年6月池田屋事件時(shí)，指揮土方隊(duì)的支隊(duì)，在接獲近藤隊(duì)攻入后與十名隊(duì)員一起進(jìn)入池田屋并且因?yàn)榇�捕八名浪人而大大的活躍。在劍客成堆的新選組里，井上的劍術(shù)雖然不起眼，但是由于他相當(dāng)了解自己的能力，所以在執(zhí)行任務(wù)時(shí)總是能夠順利完成而且從未出錯(cuò)。

        慶應(yīng)元年6月，由于組織再度編 成而擔(dān)任六番隊(duì)組長。慶應(yīng)3年6月、新選組全員被幕府拔擢為幕臣，這時(shí)源三郎作為副長助勤而被賜與七十俵三人扶持。但是幕末的政局卻受到大政奉還、王政復(fù)古等巨大命令的影響，連帶的使得屬于佐幕派新選組的源三郎漸漸處于劣勢(shì)之中。

        雖然井上的首級(jí)和愛刀被外甥的井上泰助埋于近處的寺廟中，但是正確地點(diǎn)不明。所以其墓所設(shè)置于日野市的寶泉寺。

        慶應(yīng)4年1月、鳥羽伏見之戰(zhàn)爆發(fā)。新選組因?yàn)閿��?zhàn)，于是把基地從伏見撤退移轉(zhuǎn)到淀。1月5日，新選組在淀千兩松與官軍激戰(zhàn)（淀千兩松之戰(zhàn)）。在這場(chǎng)戰(zhàn)爭的中期，井上因?yàn)槭艿綐寭舳鴳?zhàn)死。享年40歲。據(jù)說因此流傳著一則小故事，身為井上侄子的井上泰助雖然打算把井上的首級(jí)給帶回來，但因?yàn)楸黄渌��?duì)士警告井上的首級(jí)過于沉重會(huì)拖累他，因此泰助被迫在離戰(zhàn)場(chǎng)最近的寺廟中埋葬了井上的首級(jí)和刀。

電影         久野征四郎（u2018新撰組u2019、1969年、澤島忠監(jiān)督）         坂上二郎（u2018御法度u2019、1999年、大島渚監(jiān)督）

TV戲劇

        北村英三（u2018新選組血風(fēng)錄u2019、1965年、NET（テレビ朝日））

        北村英三（u2018燃えよ剣u2019、1970年、NET（朝日電視臺(tái)））

        淺田次郎（u2018壬生義士伝～新選組でいちばん強(qiáng)かった男～u2019、2002年、テレビ?xùn)|京）u203b特別出演

        小林隆（u2018新選組!u2019、2004年、NHK）