1937年夏，在上海為麥倫中學(xué)導(dǎo)演《三王》一劇，參加愛(ài)國(guó)聯(lián)合公演，先后與張庚、于伶等結(jié)識(shí)，從事救亡劇運(yùn)。同年冬參加青鳥(niǎo)劇社。1939年于伶等籌建上海劇藝社，他導(dǎo)演了首演劇目《人之初》，獲得成功。之后，又排演了不少優(yōu)秀劇目及世界名劇，導(dǎo)演藝術(shù)日臻成熟，與黃佐臨、費(fèi)穆、朱端鈞合稱(chēng)為“孤島四大導(dǎo)演”。

抗戰(zhàn)勝利后，與顧仲彝等創(chuàng)立上海市立實(shí)驗(yàn)戲劇學(xué)校，任教務(wù)長(zhǎng)，掩護(hù)田漢、安娥、洪深、歐陽(yáng)予倩等留校任教，領(lǐng)導(dǎo)師生參加反饑餓游行等進(jìn)步活動(dòng)后被迫辭職，轉(zhuǎn)入南京國(guó)立戲劇專(zhuān)科學(xué)校任教授。

中華人民共和國(guó)成立后，為蘇州市第一屆人民代表大會(huì)代表，被蘇南公署聘任為國(guó)立社教學(xué)院教授、戲劇組主任。1949年底參軍后，任華南軍政大學(xué)文藝系副主任、中國(guó)人民解放軍第三野戰(zhàn)軍政治部文藝干部訓(xùn)練班副主任。1952年調(diào)上�？茖W(xué)教育電影制片廠任副廠長(zhǎng)，1957年9月調(diào)上海戲劇學(xué)院，翌年任副院長(zhǎng)并兼任研究室、導(dǎo)演系主任。1979年執(zhí)導(dǎo)《霜天曉角》，在話劇舞臺(tái)上樹(shù)立起魯迅的生動(dòng)形象，獲文化部演出獎(jiǎng)。1979年當(dāng)選為中國(guó)戲劇家協(xié)會(huì)理事，中國(guó)文聯(lián)全國(guó)委員。

吳仞之導(dǎo)演的戲主題思想鮮明，邏輯性強(qiáng)，哲理性突出，劇情發(fā)展和人物貫穿行動(dòng)合情合理，以真實(shí)、淳樸、深刻、細(xì)致、精巧的手法，感人以情，動(dòng)人以理。他主張導(dǎo)演應(yīng)該以邏輯思維與形象思維并重。他對(duì)各種戲劇學(xué)派均有研究，博攬眾長(zhǎng)。教學(xué)上因人施教，不拘一格。1941年發(fā)表的《舞臺(tái)與四次元空間》，第一次提出如何在舞臺(tái)上運(yùn)用時(shí)空結(jié)合的“四維空間”學(xué)說(shuō)，至今仍有實(shí)踐意義。

《霜天曉角》演出后，專(zhuān)心著作，完成《仞之藝文集》4卷。