1985年，王二妮出生在榆林市榆陽區(qū)大河塔鄉(xiāng)馮家灣村，自幼能歌善舞。13歲時，父母把她送進榆林市百花藝術學校，學了兩年戲曲舞蹈專業(yè)。

1999年，剛剛組建的安塞縣藝術團到榆林招收演藝人才，王二妮和同班的十多個同學便成為安塞縣藝術團的第一批成員。這一年，名不見經(jīng)傳的她參加了延安市青年歌手大獎賽，獲得了頭等大獎。

2000年，參加陜西省MTV民歌大獎賽，比賽中榮獲三等獎。

2000年，隨團到廣西南寧參加藝術節(jié)。

2001年初，王二妮代表安塞縣去北京參加“首屆農(nóng)民歌手大賽”，獲得了第一名的好成績。

2002年，春節(jié)隨團到香港海洋公園表演；參加陜西省第三屆藝術節(jié)。

2003年，隨團到浙江嘉興參加藝術節(jié)，并參加陜西省第五屆農(nóng)民運動會。2004年，代表中國到泰國參加表演；到青海參加“青島啤酒百年華誕”表演。

2005年，除夕參加延安通往北京的“紅色專列”首屆春節(jié)聯(lián)歡晚會。

2006年，參加“陜西省第四屆藝術節(jié)”并參加紀念建黨85周年十大城市晚會。

2007年，參加全國建黨86周年黨的十七大大型歌舞晚會等。同年，參加中央電視臺《星光大道》節(jié)目，進入年度總決賽。

2008年，參與錄制中央電視臺《鄉(xiāng)村大世界》，節(jié)目中客串第二現(xiàn)場主持人；9月26日，中央電視臺《夢想劇場》節(jié)目組破例為王二妮做了個人專場。 

2009年，演唱國慶獻禮電視劇《東方紅》片尾曲《山丹丹開花紅艷艷》。演唱音樂人馮曉泉新編《東方紅》試聽版，在十一期間，網(wǎng)絡點擊率一周之內(nèi)突破10萬。同年，參加王昆從藝七十周年師生演出會  。

2011年10月7日，CCTV—3《巔峰音樂匯》王二妮專場開演，這是王二妮首次在央視的個人演唱會，央視節(jié)目檢測部門統(tǒng)計，王二妮個人演唱會創(chuàng)造了國慶七天樂收視率第一的名次。

2012年，被點時唱片重金簽約。應邀參加第二界中國孫思邈中醫(yī)藥文化節(jié)，演唱歌曲《山丹丹開花紅艷艷》。9月15日，參加山西臨汾舉辦的《中國堯都首屆堯文化旅游節(jié)開幕式》，演唱《東方紅》。11月30日，在北京昌平一個山區(qū)農(nóng)村拍攝《大辮子》MV。

2013年1月5日，加入北京歌劇舞劇院。1月18日，受邀參加中組部的“茶話會”節(jié)目錄制。9月18日，受邀在新加坡舉辦了“藝滿中秋”個人首場音樂會。9月28日、29日參加名家薈萃演出《京韻華彩》。

2014年1月，與王大治主演的電影《哭戀》在中國上映。在2014年央視馬年春晚搭檔阿寶演唱歌曲《張燈結彩》。7月21日，攜專輯首發(fā)單曲《故鄉(xiāng)》參加央視經(jīng)典訪談節(jié)目《藝術人生》暑期特別節(jié)目——《時間都去哪兒了》的錄制。

2015年1月，推出第二張專輯《我從西邊來》。7月5日起，王二妮與《走進黃土地》文化采風團成員來到陜西采風，拜訪音樂家趙季平。9月3日，參加《勝利與和平》人民大會堂大閱兵晚會；9月15日，在北京國家大劇院參演“歷史的回聲”——抗戰(zhàn)歌曲音樂會暨《抗戰(zhàn)歌選》首發(fā)式；10月31日，在澳門文化中心小劇院參演第二十九屆澳門國際音樂節(jié)《黃土謠》專場音樂會；11月3日，在香港新光戲院大劇場舉辦“黃土地的訴說”王二妮民歌音樂會。11月29日，王二妮受邀參演中央電視臺《共筑中國夢》歌曲演唱會；12月5日，在人民大會堂舉辦《黃土地的訴說》演唱會。

2016年6月16日，推出單曲《三妮兒的笑》。9月12日，2016央視中秋晚會節(jié)目單公布，王二妮在列。9月15日，在西安大唐芙蓉園參加中央電視臺中秋晚會。10月，推出單曲《媽媽教我信天游》。同年登上中央電視臺“春節(jié)聯(lián)歡晚會”的舞臺，搭檔贠恩鳳、王向榮演唱《山丹丹開花紅艷艷》。10月1日，參加中央電視臺《江山如畫——2016國慶交響音樂會》。11月30日，王二妮作為民族歌唱家的代表參加在北京人民大會堂隆重開幕的中國文學藝術界聯(lián)合會第十次全國代表大會、中國作家協(xié)會第九次全國代表大會， 并成為中國文聯(lián)第十屆全國文聯(lián)委員會委員中的兩位監(jiān)票員之一。并在文代會代表聯(lián)歡晚會中同郭蘭英、張也一起登臺獻唱。

2017年1月12日，推出單曲《吉祥中國年》和《過年的味道》；2月11日，登上中央電視臺元宵晚會與杜朋朋、正月十五組合、蜜蜂少女隊等共同演唱開場歌舞《正月十五鬧花燈》；5月11日，推出個人EP專輯《豐收中國》，專輯《盼鄉(xiāng)音》《豐收中國》《黃土地上》《又唱走西口》《丫蛋蛋》五首原創(chuàng)歌曲。6月，作為特邀嘉賓助陣《魅力中國城》紅色魅力城市延安竟演；9月3日，參與錄制《中國戲歌》，演唱《五哥放羊》；9月15日，參與拍攝并主演紅色主旋律電視劇《奔向延安》，飾演角色柳二妮 ；9月22日，錄制央視綜藝頻道《巔峰音樂匯》王二妮個人專場音樂會 ；9月28日-10月10日，王二妮和王小妮隨國務院僑辦“文化中國”一行來到美國，分別在波士頓、紐約、華盛頓、圣保羅、辛辛那提五個城市，為當?shù)貎S胞奉獻了六場演出；10月15日，隨中國文聯(lián)前往德國參加中德建交45周年“萊茵華韻”文藝晚會 ；11月1日，推出兩首單曲《在延安》和《蕎麥花》 。

2018年1月20日，參加“百花迎春——中國文學藝術界2018春節(jié)大聯(lián)歡”。2月，推出賀歲單曲《新年到》。3月13日，發(fā)行專輯《藍盈盈的天來想親親難》。4月10日，發(fā)行專輯《妹子兒生來愛唱歌》。

王二妮擔任中國陜北民歌研究會會員、陜西省音樂家協(xié)會會員、陜西省安塞縣音樂舞蹈家協(xié)會副主席兼秘書長、陜西省延安市政協(xié)委員、陜西省政協(xié)委員、陜西省音樂家協(xié)會會員、代表陜西省參加全國第十六次團代會。

2015年6月16日，中國音樂家協(xié)會第八次全國代表大會在北京召開，王二妮當選為中國音樂家協(xié)會理事。

2017年11月30日，榮獲“陜西省普法宣傳公益大使”獎。